大肠菌群测定步骤

食品大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测步骤

一、培养基制备 1、生理盐水 氯化钠 8.5g 蒸馏水 1000.0ml

将氯化钠溶于蒸馏水中,搅拌均匀后用量筒量取225ml分装到各个广口瓶中,1210C高压灭菌15min,备用。

2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤

称取37克放入烧杯,将各成分溶解于1000ml蒸馏水中,放电炉子上加热并搅拌均匀,分装于装有倒立发酵管的试管中,每管10ml,装完盖帽,1210C高压灭菌15min,双料培养基除蒸馏水不变外,其余成分加倍。

3、样品制备(在无菌室中进行) (1)固体或半固体样品

无菌操作称取样品25g置于装有225ml生理盐水的广口瓶中,充分振摇、混匀,制成1:10的样品稀释液备用。

(2)液体样品

以无菌吸管吸取样品25g置于装有225ml生理盐水的广口瓶中,充分混匀,制成1:10的样品稀释液备用。

4、样品稀释

用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1ml,沿管壁缓慢注于盛有9ml生理盐水的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管混匀,制成1:100的样品匀液。

按照该操作程序,可制备1:1000,1:10000。。。。。。等10倍系列稀释样品匀液,每递增稀释一次,换用1次1ml无菌吸管或吸头。

根据对样品污染状况的估计,选择2-3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释时,吸取1ml样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时分别吸取1ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。

二、大肠菌群的测定(MPN法)

1、选取适宜的三个连续稀释度的样品匀液,每个稀释度均接种三管月桂基硫酸

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